稀釋塗佈法與平板劃線法是最常用的兩種微生物分離純化方法。
一、平板劃線分離法
由接種環以菌作沾取少待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步分散開來,如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表面得到單菌落。
用途：一般多用於從菌株的純化優點：簡便快速，可以觀察菌落特征缺點：不能用於計數
【常見問題】
(1) 培養基滅菌後，需要冷卻到50 ℃左右時，才能用來倒平板，你用什麼辦法來估計培養基的溫度？
答：一般是放到50℃左右的恒溫水浴鍋裡，如果沒有水浴鍋，用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。
(2) 為什麼在用『分劃線分離法』接種時，每次要灼燒接種環
答：防止雜菌，提高培養純度。
(3) 請問生物的平板劃線分離法劃線時都有那些技巧啊~~~
答：平板劃線分離法要求後面的劃線要在前一次的末尾劃線，在作時要細心，劃線的手盡量維持前面的姿勢，左手轉動培養皿。
(4)用平板劃線分離法分離土壤滲出液中的細菌後，分離出來的純種菌？
答：隻能說放線菌是比較多的，因為土壤這個環境適合它的生長！你說能否分離其他菌？也可以吧！在進行劃線之後平板會出現多菌，像放線菌，細菌，真菌等；接下來就是鑒定了，再之後就是純化了，這樣應該可以分離所需菌種！
(5) 請問平板劃線分離法的原理是什麼?
答：接種針每次劃線都會造成菌體分佈更為稀疏，最終達到單菌落。
(6) 用劃線法分離菌種，怎樣保證得到相互分離的菌落
答：這個需要經常作練，不是看看經驗就能掌握的。
要得到單個菌落，首先需要分劃線，在劃線時要估計一下樣本中菌的數量，以決定2之間重疊的線數；第一一般很少能出來單個菌落，因此所占平板面積不要太大，要留給後幾能出單個菌落的；我總結的劃線的作要點是：密、直、勻。
(7) 為什麼需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？
答：灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基
(8) 平板冷凝後，為什麼要將平板倒置？
答：平板冷凝後，皿蓋上會凝結水珠，凝固後的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。
(9) 在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什麼？
答：不能。
空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生。
(10) 為什麼在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什麼？
答：操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束後，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源於上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。
劃線結束後灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。
(11) 在灼燒接種環之後，為什麼要等其冷卻後再進行劃線？
答：以免接種環溫度太高，殺死菌種。
(12) 在作第二次以及其後的劃線操作時，為什麼總是從上一次劃線的末端開始劃線？
答：劃線後，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。
二、稀釋塗佈平板法
先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋(如 1:10、1:100 、1:1000、1:10000 …)，然後分別取不同稀釋液少，與已溶化並冷卻至 45 ℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中,，待瓊脂凝固後，制成可能含菌的瓊脂平板，保培養一定時間即可出出菌落。
如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散。
塗佈平板的所有操作都應在火焰附近進行。
結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？
答：應從操作的各個細節保證『無菌』。
例如，酒精燈與培養皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。
用途：一般多用於篩選菌株優點：可以計數，可以觀察菌落特征。
計數時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在《否則一個菌落就不隻是代表一個細胞》，再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分佈於平板中的培養基內。
經培養後，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。
此法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數，故又稱活菌計數。
缺點：操作相對麻煩
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